证券简称:海能仪器
证券代码:430476
       
       

ALC10黄曲霉毒素液相色谱分析仪测定花生中黄曲霉毒素含量


1 前言

中国是世界第二大玉米生产国和第一大玉米消费大国,播种面积仅次于稻、麦,在粮食作物中居第三位,玉米作为一种长寿食品,富含丰富的营养成分,其中蛋白质含量是仅次于糖类的营养成分。本实验选取了黑龙江、辽宁和河南的大米,对玉米中的蛋白质使用杜马斯分析仪进行定量测定。

2 仪器与试剂

2.1仪器

ALC10黄曲霉毒素液相色谱分析仪;高速粉碎机;超声波;天平;离心机;固相萃取装置(带真空泵);免疫亲和柱;氮吹仪。

2.2试剂与材料

磷酸盐缓冲溶液PBS);

1%TritonX-100;

甲醇:色谱纯

乙腈:色谱纯;

黄曲霉毒素AFT G2,G1B2B1混合标准品:sigma;

样品:花生。

3 实验方法

3.1样品制备

样品粉碎:取花生样品1kg,用高速粉碎机将其粉碎,2mm孔径试验筛,混合均匀后缩分至100g,储存于样品瓶中,密封保存。

样品提取:称取5g上述试样于50mL离心管中,加入20.0mL乙腈-水溶液(84+16),涡旋混匀,置于超声波中振荡20min,在6000r/min下离心10min,取上清液。

样品净化:准确移取4mL上述上清液,加入46mL1% TritonX-100的PBS,混匀。

免疫亲和柱内的液体放弃后,将上述样液移至50mL注射器筒中,调节下滴速度,控制样液以1mL/min~3mL/min的速度稳定下滴。待样液滴完后,往注射器筒内加入2×10mL水,以稳定流速淋洗免疫亲和柱。待水滴完后,用真空泵抽干亲和柱。脱离真空系统,在亲和柱下部放置10mL刻度试管,取下50mL的注射器筒,2×1mL甲醇洗脱亲和柱,控制1mL/min~3mL/min的速度下滴,再用真空泵抽干亲和柱,收集全部洗脱液至试管中。在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干,用初始流动相定容至1.0mL,涡旋30s溶解残留物,0.22μm滤膜过滤,收集滤液于进样瓶中以备进样。

 

3.2标准品制备

取标准品用流动相稀释成一系列标准溶液工作液。(含AFT B1 和AFT G1浓度为 0.1ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL,AFT B2 和 AFTG2浓度为0.03ng/mL、0.15ng/mL、0.6ng/mL、1.5ng/mL、3.0ng/mL、6.0ng/mL、12ng/mL 的系列标准溶液)。


3.3仪器方法

a) 流动相:A相,水;B相,乙腈-甲醇(50+50);

b) 等梯度洗脱条件:A,68%;B,32%;

c) 色谱柱:C18柱(柱长150mm,柱内径4.6mm,填料粒径5μm);

d) 流速:1.0mL/min; 

e) 柱温:40 ℃;

f) 进样量:50μL;

g) 激发波长:360nm;发射波长:440nm。


4 测试结果

4.1实验结果

样品名称

线性方程

相关系数

AFT G2

Y=700884.13764X-13593.24141

0.99986926

AFT G1

Y=359110.95953X+2916.11000

0.99990015

AFT B2

Y=1095316.89809X+43446.01819

0.99996759

AFT B1

Y=544647.86355X+75594.50036

0.99996162


样品名称

LOD最低检出限(μg/kg

AFT G2

0.00856

AFT G1

0.01795

AFT B2

0.00624

AFT B1

0.00482




4.2结论

使用ALC10黄曲霉毒素液相色谱分析仪测定花生中黄曲霉毒素G2,G1B2B1线性良好。黄曲霉毒素G2,G1B2B1的检出限均符合国标要求。

参考文献

[1] GB 5009.22-2016 食品安全159彩票 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

[2] GB 2761-2017 食品安全159彩票 食品中真菌毒素限量